Product Informations

• Product No. BDAG0026
• Product Name Mouse Tissue One-Step Direct Amplification PCR Kit (With Dye)
• Category 601
• Instruction Manual /files/uploads/instructions/2024/202401/BDAG0026_小鼠组织一步法直扩 PCR 试剂盒(With Dye)_说明书.pdf

Picture

Product Details

货号	规格	反应次数
BDAG0026-1ml	1ml	100rxn（10ul/rxn）
BDAG0026-5ml	5ml	500rxn（10ul/rxn）

产品描述：
本试剂盒包含小鼠组织DNA快速释放试剂和PCR扩增试剂，可针对小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织快速释放基因组DNA，而无需进行核酸提取，释放的产物可直接进行PCR扩增，可快速对小鼠进行基因分型。
试剂盒中的Mouse Tissue Direct PCR Mix 为2×浓度的预混试剂，包含Taq DNA Polymerase、Mg2+、dNTP以及优化的缓冲液，操作简单并减少了污染的可能性，可实现高通量检测。只需向反应体系加入引物和模板即可进行PCR反应。体系中加入的保护剂使得2×Master Mix反复冻融后仍保持较高的活性。产品中含有染料，PCR产物可以直接进行电泳检测。


产品特点
1. 试剂盒无需对小鼠组织进行核酸提取或纯化，直接进行PCR反应，省时省力
2. Mouse Tissue Lysis Buffer 配合蛋白酶K可快速对小鼠组织进行裂解；
3. 扩增产物在2kb以内效果最佳；
4. 产品中含有染料，PCR产物可以直接进行电泳检测。

实验流程
1. 样本制备

1. 剪取 1-5mm 的鼠尾（或者3-5mm 直径的鼠耳、 2-3 个小鼠脚趾）。
2. 分别向样品中加入200µL Mouse Tissue Lysis Buffer 和4µL Proteinase K，涡旋混匀后在55℃水浴锅中孵育30min，孵育完成后将样品置于95℃条件下加热10min。

备注：若处理样品较多，可提前将Mouse Tissue Lysis Buffer和Proteinase K混合起来，涡旋混匀后备用。

3. 将以上产物进行涡旋振荡充分混匀后，于12000rpm离心2-5min，取上清即可进行 PCR 反应。

2. 扩增体系和条件

1. 反应体系制备

组分	体积(µL per sample)		终浓度
	Mix A	Mix B
2×Mouse Tissue Direct PCR Mix Forward Primer (10 μM) Reverse Primer (10 μM) Template*  PCR Grade H2O	10 0.5     0.5    1 To 20	25 1.0          1.0 2.5 To 50	1× 0.25 μM 0.25 μM / /
总体积/rxn	20	50

*备注: DNA模板加入量建议为反应总体积的5-10%。
 

2. 反应程序

Step	Temp.	Time	Cycle
Initial Denaturation	95℃	2 min	1 Cycle
Denaturation Annealing*1 Extension*2 Final Extension	95℃ 60℃ 72℃ 72℃	25 sec 25 sec 1 min 7 min	35~40 Cycles

*备注: *1 ：Annealing 退火温度根据引物的实际退火温度(Ta)进行设置；
      *2 ：延伸速度为 30sec/kb，根据扩增片段大小进行调整。
 

3. 扩增产物检测

PCR 扩增完成后， 产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳的检测。

应用实例
使用本试剂盒对鼠尾的不同片段大小的基因进行检测，均能良好的完成扩增。



注意事项

1. PCR Mix解冻需要在冰上进行，并避免反复冻融；
2. PCR反应配制过程需在冰上进行，各成份加毕后请短暂涡旋混匀并离心；
3. 样本制备阶段中Proteinase K灭活步骤必不可少；
4. 请避免核酸酶污染样本，否则可能造成扩增反应出现困难的情况；

请仔细阅读本说明，严格按照操作流程和推荐用量使用本产品。