Product Informations

• Product No. BDAG0052
• Product Name Mouse Tissue Direct Expansion TaqMan qPCR Kit
• Category 601
• Instruction Manual /files/uploads/instructions/2023/BDAG0052_小鼠组织直扩TaqMan qPCR试剂盒_说明书.pdf

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Product Details

试剂组分：

组分名称	货号
	BDAG0052-1ml	BDAG0052-5ml	BDAG0052-10ml
2×Mouse Tissue Direct TaqMan qPCR Mix	1 mL	5 mL	10 mL
Buffer TLB03	20 mL	100 mL	2,000 mL
ROX ReferenceⅠ (50×) *	40 µL	200 µL	400 µL
ROX ReferenceⅡ (50×) *	40 µL	200 µL	400 µL

*备注：ROX Reference为另行选配试剂，本产品未含；针对不同型号Real-Time PCR仪使用方法如下：
1. ROX Reference Ⅰ(50×)为高浓度ROX，适用于如下型号Real-Time PCR仪：
- Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System(Thermo Fisher Scientific)；
- Applied Biosystems 7900 Real-Time PCR System(Thermo Fisher Scientific)；
- Step One Plus Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)。
2. ROX Reference Ⅱ (50×)为低浓度ROX，适用于如下型号Real-Time PCR仪：
- AppliedBiosystems 7500 Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)；
- AppliedBiosystems 7500 FAST Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)。
3. 当使用于如下型号Real Time PCR扩增仪时，无需加入ROX Reference：
-Roche、Bio-Rad、TaKaRa、宏石、雅睿、博日、天隆等其它无需加入ROX校准染料的Real-Time PCR仪。


产品描述

本试剂盒包含小鼠组织DNA快速释放试剂和TaqMan qPCR扩增试剂，可针对小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织快速释放基因组DNA，而无需进行核酸提取，释放的产物可直接进行qPCR扩增，可快速对小鼠进行基因分型。

试剂盒中的2×Mouse Tissue Direct TaqMan qPCR Mix为 2×浓度的预混试剂，包含热启动DNA聚合酶、Mg2+、dNTP以及优化的缓冲液，操作简单并减少了污染的可能性，可实现高通量检测。只需向反应体系加入引物探针和模板即可进行qPCR反应。体系中加入的保护剂使得Mix反复冻融后仍保持较高的活性。

产品特点

1.试剂盒无需对小鼠组织进行核酸提取或纯化，直接进行qPCR反应，省时省力；

2.Buffer TLB03可10min完成对小鼠组织的裂解释放基因组DNA。

实验流程

1.样本制备

1)剪取1-5mm的鼠尾（或者3-5mm直径的鼠耳、2-3个小鼠脚趾）。

2)分别向样品中加入200µL Buffer TLB03，涡旋混匀后将样品置于95℃条件下加热10min。

3)将以上产物进行涡旋振荡充分混匀后，于12000rpm离心2-5min，取上清即可进行PCR反应。

 

2.扩增体系和条件

1)反应体系制备

组分	体积 (µL per sample)		终浓度
	Mix A	Mix B
2×Mouse Tissue Direct TaqMan qPCR Mix Forward Primer (10 μM) Reverse Primer (10 μM) Probe (10 μM) Template* PCR Grade H2O	10 0.5     0.5 0.4            2 To 20	25 1.0          1.0 0.4 5 To 50	1× 0.25 μM 0.25 μM 0.2 μM / /
总体积/rxn	20	50

*备注：DNA模板加入量建议为反应总体积的10-20%。

2)反应程序

Step	Temp.	Time	Cycle
Initial Denaturation	95℃	5 min	1 Cycle
Denaturation Annealing / Extension / Data Collection	95℃ 60℃	15 sec 30 sec	35~45 Cycles

应用实例

使用本试剂盒对基因编辑鼠尾进行qPCR检测，均能良好的完成扩增。
 

注意事项

1.qPCR Mix解冻需要在冰上进行，并避免反复冻融；

2.PCR反应配制过程需在冰上进行，各成份加毕后请短暂涡旋混匀并离心；

3.请避免核酸酶污染样本，否则可能造成扩增反应出现困难的情况；

4.请仔细阅读本说明，严格按照操作流程和推荐用量使用本产品；