1. 产品介绍
Boric Acid Beads 4FF 是将硼酸类化合物偶联至琼脂糖凝胶上，能够结合含有 1,2 顺式二醇基团的分子。因此 Boric Acid Beads 4FF 可以用于结合糖类、核苷、核苷酸、核酸及酶类等，特别适合糖蛋白的分离纯化。Boric Acid Beads 4FF 稳定性好，应用广泛，可以在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。具体性能见表 1。
表1. Boric Acid 亲和层析介质产品性能
| 性能 |
指标 |
| 基质 |
高度交联的4%琼脂糖微球 |
| 配体 |
氨基苯硼酸 |
| 配基密度 |
>20µmol/ml 介 质 |
| 粒径 (μm) |
45-165 |
| 最大流速 |
300cm/h |
| pH 稳定范围 |
3-10 |
| 储存缓冲液 |
含20% 乙醇的1×PBS |
| 储存温度 |
2-8℃ |
2. 纯化流程
2.1 Buffer的准备
所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm或0.45 μm滤膜过滤。
-核苷类分离纯化
-平衡/洗杂Buffer: 50mM Phosphate buffer，1.0M NaCl，pH7.8
-洗脱Buffer: 50mM Phosphate buffer，1.0M NaCl，100mM 山梨醇，pH7.8
-糖蛋白分离纯化
-平衡/洗杂Buffer: 50mM taurine/NaOH，20mM MgCl2，pH8.7
-洗脱Buffer: 50mM taurine/NaOH，20mM MgCl2，100mM 山梨醇，pH8.7 或 50mM Tris/HCl，pH8.7
注意: 平衡液和洗脱液中不能有 Tris 及三乙醇胺类的物质。
2.2 样品准备
样品在上样前建议离心或用0.22μm 或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
2.3 Boric Acid Beads 4FF 装填
Boric Acid Beads 4FF 被广泛应用于工业纯化，因此，涉及到各种中压色谱层析柱的填装， 下面介绍使用 Boric Acid Beads 4FF 填装层析柱的方法。
层析柱的装填（使用储液器装填）
-用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出 1-2cm 的去离子水。
-将树脂悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减 少气泡的产生。
-如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面， 连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。
-打开层析柱底部出口，开启泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用你所使用泵的最大流速，这样也可以得到一个很好的装填效果。（注意：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的 75%）当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上 3 倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
-关闭泵，关闭层析柱出口。
-如果使用储液器，去除储液器，将分配器置于层析柱中。
-将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。
-将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
2.4样品纯化
Boric Acid Beads 4FF 装填好后，可以用各种常规的中低压色谱系统。
-将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中，打开下出口，将 预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
-用 3-5 倍柱体积的去离子水冲洗出储存缓冲液。
-使用至少5倍柱床体积的结合/洗杂液平衡色谱柱。
-利用泵或样品环上样。注: 样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
-用结合/洗杂液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。
-使用 5-10 倍柱体积的洗脱液洗脱，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
2.5 SDS-PAGE 检测
将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用SDS-PAGE 检测纯化效果。
3. 层析介质再生和清洗
3.1层析介质再生
3倍柱体积的 0.1M Tris-HCl，0.5M NaCl, pH8.5 和 0.1 M 醋酸钠，0.5M NaCl, pH4.5重复清洗 3次。5倍柱体积的平衡液平衡。
纤维蛋白溶酶原纯化后可以用 5倍柱体积的含有 0.2M氨基己酸和1M NaCl的结合液清洗。核酸纯化后可以用 5倍柱体积的含有2M NaCl的结合液清洗。
3.2层析介质清洗
再生未洗脱掉的变性蛋白和脂类可以用 0.1% Triton X-100, 37°C 清洗。然后用5倍柱体积结合液平衡。
3.3层析介质保存
层析介质可以保存在含有 20%乙醇的 1XPBS 中，2-8°C 保存
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