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概述
胰酶（Trypsin-EDTA）是最常用的细胞分离试剂，为223个氨基酸组成的单链多肽，是胰蛋白酶原（Trypsinogen）在Lys6和Ile7之间切除氨基N末端6肽（Hexapeptide）得到的。胰酶属于丝氨酸水解酶家族，活化位点包括His46和Ser183，胰酶裂解Lysine的羧基末端和Arginine的氨基末端，水解效率在任何一端存在酸性氨基酸时降低，而当Proline存在于裂解位点的羧基末端一侧时，水解反应不能发生。胰酶的最佳使用pH值为7.2-9.2。
成分
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货号 |
BDXB0020 |
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胰酶 |
0.25% |
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EDTA·4Na |
0.02g/L |
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酚红 |
N/A |
操作步骤
注：使用前将胰酶解冻，保存在4℃，建议不要反复冻融。
1. 移除细胞培养瓶/皿中的培养液，用适量不含钙和镁离子的PBS或D-PBS快速冲洗细胞1-2次，完全移除培养瓶/皿中的液体；
2. 加入适量（250px培养皿加入0.5ml）胰酶，转动培养瓶/皿，让细胞和胰酶充分接触；
3. 置于37℃培养箱中，孵育1-5min（不同细胞类型有所不同）；
4. 轻轻磕击培养瓶/皿，在倒置显微镜下观察，大多数细胞荧光橙悬浮状态；
5. 加入培养基，用移液管吹打5-10次，按照实验要求将细胞种植到新的培养瓶/皿中。
注意事项
1. 胰酶对细胞有损伤，应尽量缩短孵育时间；
2. 如果细胞培养在不含血清的培养基中，胰酶消化完毕，加入PBS，500×g离心10分钟，移除PBS，将细胞重悬于所用的培养基中。
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